Како направити храњиви агар у Петријевим посудама

Видео: Агрогороскоп поливов на февраль 2022 года

Садржај

Упутства
Како
Шта ти треба

Храњиви бујон се користи за култивисање бактерија, као што је Есцхерицхиа цоли. Рецепти за овај бујон варирају у зависности од врсте бактерија, као и присуства генетских модификација, као што је отпорност на антибиотике, на пример. Бујон се може очврснути додавањем агар-агара, који омогућава бактеријама да формирају различите колоније, док се у течној култури оне једноставно диспергирају кроз волумен. Ово је основна техника, али неопходна за напредне методе као што су клонирање гена или микробиолошки тестови. Овај рад претпоставља да ће се лабораторијски сојеви Есцхерицхиа цоли узгајати у Луриа агар плочама (или Петријевим посудама).

Упутства

Петријеве плоче (Јупитеримагес / Цомстоцк / Гетти Имагес)

Измерити 10 г бактеријског триптона, 5 грама екстракта квасца, 5 грама натријум хлорида, 15 грама агара или агарозе и 1 мл 1Н натријум хидроксида. Помешајте их са стерилном, аутоклавираном запремином дестиловане воде све док не добијете 1 л медијума. Аутоклавујте медијум у флашице или полу-покривене бочице 25 минута. Оставити да се охлади на око 50 ° Ц пре додавања реагенса који се могу уништити високом топлотом, као што су антибиотици или други додаци исхрани.
Оставити аутоклаву да се охлади на 50 ° Ц и не мање од 45 ° Ц, пошто ће се агар пре изливања залијепити за контејнер. Набавите стерилне Петријеве посуде и сипајте довољно да покрије целу површину и најмање половину њихове дубине. Избегавајте прекомерно пуњење и не дозволите да агар дође до горње ивице плоче. Причекајте скрућивање у стерилном окружењу (на примјер, у ламинарној проточној комори), остављајући поклопце отворене и један угао поклопца.
Осушите плоче. Иако се могу користити чим су чврсти, на површини агара ће бити присутна нека влага, што ће спријечити да се колоније бактерија довољно приањају. Зато је боље да се плоче осуше пре наношења било које бактерије, на пример остављањем на собној температури неколико дана или пола сата под ламинарном проточном комором или у инкубатору од 37 ° Ц.
Спремите плоче. Осушене плоче треба наслагати наопако (обрнуто) и поново уградити у оригиналну амбалажу, запечатити траком и омотати фолијом како би их заштитили од свјетлости, или у одговарајућој посуди. Увек напишите датум припреме и избегавајте употребу ако су таблице старе више од два месеца.

Како

Изводите онолико претходних корака (пожељно све) у стерилном окружењу (на пример, под пламеном или ламинарним поклопцем) да спречите да бактеријски загађивачи из ваздуха уђу и расту у медијуму.