Садржај
- Детекција помоћу промена боје
- Коришћење ЕЛИСА читача за мерење
- Директна компетитивна ЕЛИСА (цитокром ц)
- Инкубирајте примарно антитело у епрувете
ЕЛИСА тест је ензимски имуносорбентни тест који користи антитела или антигене повезане са специфичним ензимом како би се одредила концентрација антитела или антигена. Ако узимате ЕЛИСА тест и не можете да користите специфична антитела за добијање резултата, препоручује се компетитивна ЕЛИСА јер користи антиген коњугован са ензимом уместо антитела и другачији метод детекције.
Детекција помоћу промена боје
Уобичајени протокол за компетитивну ЕЛИСА је употреба необележеног и пречишћеног примарног антитела. Антитело облаже јажице микротитарске плоче и инкубира се са непознатим стандардима. Затим се додаје имуноген за коњугацију са примарним антителом, који ће се везати за места антитела која још увек нису заузета. Затим се користи супстрат за стварање промене боје за мерење концентрације везивања.
Коришћење ЕЛИСА читача за мерење
Користите микротитар полистиренску плочу и додајте примарно антитело у сваку јажицу. Да би се постигло максимално везивање, добро попунити бунар са једним микрограмом антитела. Инкубирајте плочу четири сата на собној температури. Додати примарно антитијело за сакупљање и испирати бунаре са ПБС (фосфатни пуфер сланим раствором). Инкубирајте плоче са блокирајућим пуфером два сата на собној температури. Испрати бунаре поново два пута са ПБС и додати стандарде. Раствор антигена-коњугата ставите у бунаре и поново инкубирајте два сата. Плоча се поново испере са ПБС четири пута. Додајте супстрат и измерите густине на специфичној таласној дужини помоћу ЕЛИСА читача.
Директна компетитивна ЕЛИСА (цитокром ц)
За директну компетитивну ЕЛИСА анализу, мора се извршити анализа разрјеђења серума за антиген који користите у експерименту. Микротитарска плоча је затим обложена цитохромом ц и инкубирана преко ноћи. ЕЛИСА део теста се затим изводи додавањем реагенса за блокирање и секундарног антитела. Резултати апсорбанције се очитавају са читачем микроплоче.
Инкубирајте примарно антитело у епрувете
У овој процедури, примарно антитело се инкубира у епруветама у којима се антиген од интереса везује за њега. Узорци се затим додају у јажице микротитарске плоче и инкубирају. Затим се бунари исперу да се уклоне сви невезани комплекси антиген-антитело, а затим се дода раствор за блокирање како би се спречило везивање другог антитела за базенчиће. Секундарно антитело се затим очитава на читачу плоче да се добију резултати.