Садржај
Туберкулоза је заразна болест коју узрокује бактерија Мицобацтериум туберцулосис и респираторна је болест коју карактеришу гомољне формације, некроза, апсцеси, фиброза и калцификација у плућима. Такође може инфицирати бубреге, лимфне чворове, кости, зглобове и кожу.
Примарна лабораторијска дијагноза овог бацила укључује бојење ради визуализације бактерија под микроскопом. Одабрани узорак је испљувак или бронхоалвеоларни лаваж за идентификацију респираторне инфекције или узорак стварног ткива.
Физиологија
Мицобацтериум туберцулосис је штапичасти организам (бацили), непокретна, необавезна спора. Дужина ове бактерије је 0,4к3 микрометара и подвргава се бинарној фисији (подели репродуктивне ћелије) сваких 15 до 24 сата, што се сматра спорим у поређењу са другим бактеријама. Због тога микобактеријама може требати и до девет недеља да се појаве у медијуму за културу.
Овај организам је осетљив на УВ светлост и топлоту (попут пастеризације), али се одупире хемијским дезинфицијенсима.
Грамова мрља
Мицобацтериум туберцулосис не може се заиста класификовати као грам-позитиван или грам-негативан. Ова класификација је направљена на основу количине пептидогликана у ћелијском зиду бактерије. Грам-позитивна врста има дебели слој овог молекула (око 90%), док грам-негативна врста има танак слој (од 5% до 20%). Мрље по Граму продиру у ћелијски зид и везују се за хемијске компоненте у њему. Под микроскопом, обојене бактерије постаће љубичасте или ружичасте.
Са микобактеријом туберкулозе, ћелијски зид је састављен од пептидогликана, али и сложених липида који инхибирају продор грам боје. Ћелијски зид се такође одупире дисколорацији киселином или алкохолом, због чега се микобактерија назива „отпорном на киселине“. Липиди ћелијског зида су миколична киселина, фактор жице и Д-восак. Ако би се бактерије обојиле, ћелије би изгледале грам-позитивне или благо бледе са врло мало боје.
Да би се виделе бактерије, морају се користити посебне мрље, попут мрља Аумарине или Зхиел-Неелсон.
Мрља од аумарин-родамина
Процес који користи аурамин-родамин користи жуту флуоресцентну боју за визуализацију микобактерије туберкулозе под флуоресцентним микроскопом. Калијум перманганат или акридин наранџа могу се користити као контрастна боја. Испод сочива, бактеријске ћелије ће изгледати зелено.
Аурамин-родаминска боја је осетљивија од Зхиел-Неелсон-а и економски исплативија.
Зиехл-Неелсон бојање
Мрљу Зиехл-Неелсон креирали су научници Франз Зиехл и Фриедрицх Неелсен, а користи загрејани карбол-фуксин, високу концентрацију киселине-алкохола и контрастну боју, попут зеленог малахита или метилен плаве боје. Под флуоресцентним микроскопом, бактеријске ћелије ће изгледати светло ружичасто.
Зиехл-Неелсон боја је стандард изврсности за прелиминарну идентификацију микобактерија туберкулозе и микобактерије лепра.
Агар
Секундарно у односу на идентификацију микроскопије, микобактерије туберкулозе морају се узгајати на посебној агар култури. Ловенстеин-Јенсен желатина садржи сложене органске супстанце (попут јаја и кромпира), соли, глицерол и малахит зелено (што инхибира друге бактерије). Антибиотици се могу додати да би даље инхибирали контаминирајуће микроорганизме. Узорак се стави на овај агар, а бактерије расту за три до девет недеља.
Раствор хранљиве културе, попут албумина и биотина, може се користити за подршку расту и најмање количине циљних бактерија. Ово је познато као Миддлеброок 7Х9 (или 7Х12).
У оба медија колоније ће изгледати као мале, глачане колоније светло смеђе боје.
Уз напредну технологију, микобактеријуми туберкулозе сада се могу узгајати помоћу аутоматизованог читача. Течни раствор медија Миддлеброок 7Х9 и једињење флуоресцентног индикатора користе се за праћење раста и пријављивање позитивне или негативне инфекције.